β-木糖苷（β- xylosidase）测定试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-235016

分光光度法 50管/24样 

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定

β-木糖苷活性测定意义

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵、另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值

β-木糖苷活性测定原理

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰，测定 405nm 光吸收增加速率，可计算β-木糖苷 活性。

自备实验用品及仪器

天平、温离心机、可见分光光度、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存

试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存

试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存

粗酶液提取

1.组织：按照组织质量（g） 提取液体 (mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组 ，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清待测

2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3.液体：直接检测。

β-木糖苷活性测定操作表

β-木糖苷酶活性计算公式 

标准曲线 y=3.34x-0.001，R²=0.9991

1、按蛋白浓度计算

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位

   = 542.4×(A405+0.001)÷ Cpr  

2、按样本重量计算

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

                                  = 542.4×(A405+0.001)÷W

3、按细胞数量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每104 个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

                                = 542.4×(A405+0.001)÷细胞数量（万个）

4、按液体体积计算        

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

                             = 542.4×(A405+0.001)

V 样总：加入提取液体 ，1mL；V 反总：反应总体 ，1mL；V 样：反应中样品体积，0.2mL；138：对硝基苯酚分子量：Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质 ，g；T：反应时间，20min；1000:1mmol/L=1000µmol/L

注意事项

1、吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间 否则 大样品 或稀释样品，注意 算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变

2、样品蛋白质含量需要另外测定，可选用 BCA 法测定蛋白含量试剂盒进行测定

注：系统试剂盒说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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