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二氢黄酮醇还原酶(Dihydro flavonol reductaseDFR

试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-23088

微量法 100管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

二氢黄酮醇还原酶酶活测定意义

二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶,在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

二氢黄酮醇还原酶酶活测定原理

二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素,可与香草醛缩合形成红色化合物,在500nm 处有特征吸收峰。

二氢黄酮醇还原酶酶活试剂盒需自备的仪器和用品

研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。

二氢黄酮醇还原酶酶活试剂组成和配制

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 12mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 1.5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 2mL 蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存, 禁止反复冻融。

试剂四:液体 30mL×1 瓶,4℃避光保存。

酶液提取

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g  ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

二氢黄酮醇还原酶酶活测定操作表

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 500nm。

2、 操作表

 详见说明书

混匀,25℃静置 10min,于微量石英比色皿/96 孔板中测定 500nm 处吸光值 A。分别记为 A 对照管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 对照管

酶活性计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.0184x+0.0002,R2=0.999

(1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在 30℃,pH7.5 条件下,每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0184×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T÷2= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr

此法蛋白质含量需另外测定,我司提供三种方法蛋白质浓度试剂盒(QYS-237009)双缩脲法、(QYS-237011)考马斯亮蓝法、(QYS-237013)BCA法。

(2)按照样本质量计算

酶活性定义:在 30℃,pH7.5 条件下,每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性(mmol/min/g 鲜重)= (△A-0.0002)÷0.0184×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T÷2= 9.06×(△A-0.0002)÷W

V 反总:反应总体积,1mL;V 样:反应体系中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.0092x+0.0002,R2=0.999

(1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在 30℃,pH7.5 条件下,每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0092×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T÷2= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr

此法蛋白质含量需另外测定,我司提供三种方法蛋白质浓度试剂盒(QYS-237009)双缩脲法、(QYS-237011)考马斯亮蓝法、(QYS-237013)BCA法。

(2)按照样本质量计算

酶活性定义:在 30℃,pH7.5 条件下,每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性(mmol/min/g 鲜重)= (△A-0.0002)÷0.0092×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T÷2= 9.06×(△A-0.0002)÷W

V 反总:反应总体积,1mL;V 样:反应体系中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min

注:电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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