花青素还原酶（anthocyanidin reductase，ANR）

试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-23090

微量法 100管/48样

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定

花青素还原酶(ANR)酶活测定意义

花青素还原酶是黄酮合成途径中的关键酶，在植物体内起非常重要的调控作用，对花青素还原酶的调控机制研究有利于从基因水平改变植物的品质。

花青素还原酶(ANR)酶活测定原理

花青素还原酶在 NADPH 存在的条件下作用于飞燕草色素转变为表没食子儿茶素和NADP，使反应体系在 340nm 处的吸光值下降，吸光值下降速率反应了

花青素还原酶的活性。

花青素还原酶(ANR)酶活试剂盒需自备的仪器和用品

天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。

花青素还原酶(ANR)酶活试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃ 保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃ 保存，禁止反复冻融。

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃ 保存，禁止反复冻融。

酶液提取

1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心 

10min，取上清，置冰上待测。

2.培养液等液体：直接检测。

测定操作表

详见说明书

花青素还原酶(ANR)酶活性计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按照蛋白浓度计算

酶活性定义：在 40℃，pH6.5 条件下，每毫克蛋白每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T= 80.39×ΔA÷Cpr

此法蛋白质含量需另外测定，我司提供三种方法蛋白质浓度试剂盒(QYS-237009)双缩脲法、(QYS-237011)考马斯亮蓝法、(QYS-237013)BCA法。

（2）按照样本质量计算

酶活性定义：在 40℃，pH6.5 条件下，每克组织每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T= 80.39×ΔA÷W

（3）按液体体积计算

酶活性定义：在 40℃，pH6.5 条件下，每毫升液体每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/mL）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T= 80.39×ΔA

V 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：

加入提取液体积，1mL；T：反应时间，20min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

（1）按照蛋白浓度计算

酶活性定义：在 40℃，pH6.5 条件下，每毫克蛋白每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T= 160.78×ΔA÷Cpr

此法蛋白质含量需另外测定，我司提供三种方法蛋白质浓度试剂盒(QYS-237009)双缩脲法、(QYS-237011)考马斯亮蓝法、(QYS-237013)BCA法。

（2）按照样本质量计算

酶活性定义：在 40℃，pH6.5 条件下，每克组织每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T= 160.78×ΔA÷W

（3）按液体体积计算

酶活性定义：在 40℃，pH6.5 条件下，每毫升液体每分钟催化 1nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。

ANR 活性（nmol/min/mL）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T= 160.78×ΔA

V 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：

加入提取液体积，1mL；T： 反应时间，20min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注：电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

返回