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白细胞裂解液

White Blood Cell Lysis Buffer

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-SH0642

10ml

白细胞裂解液产品简介:

可以用于全血中祛除红细胞后,白细胞中的核酸与蛋白的的进一步分离和提取等,所得到的白细胞基因组可以用于细胞分子生物学的

各种实验。所得到的蛋白质可以用于白细胞中蛋白质分离纯化和蛋白质电泳。

试剂的组成和配置:

白细胞裂解液:液体10 mLL×1 瓶,常温下运输,收到后,将白细胞裂解液在4℃的冰箱冷藏室中保存,保质期两年。

白细胞裂解液操作步骤:

1. 采集新鲜血液,用EDTA、肝素或柠檬酸抗凝,取0.5 mL抗凝全血,加入红细胞裂解液,充分震荡混匀,在室温下放置5 min,再10000 

rpm(10000 g)离心2 min,弃上清。

2. DNA提取:将沉淀用双蒸水洗涤两次,10000 rpm 离心10 min,搜集灰白色的白细胞沉淀,加入溶液A 400 μL和0.4 mg蛋白酶K于沉淀

中,55°C水浴2 h。再加入100 μL 7.5 mol/L 乙酸铵,10000 rpm,离心l0 min。取上清,加人2 倍体积无水乙醇,上下振摇,至DNA 

沉淀出,10 000 rpm 离心10 min回收沉淀。用1 mL 70%乙醇洗涤沉淀物1 次,离心,干燥沉淀,溶于 30 μL TE 中。

3. 蛋白提取:将沉淀用双蒸水洗涤两次,10000 rpm 离心10 min,搜集灰白色的白细胞沉淀,加入溶液A 400 μL,震荡并4℃放置10

 min后,10000 rpm离心l0 min,上清可以用于SDS-PAGE 电泳。

白细胞裂解液注意事项:

1. 加乙酸氨,离心10 min后,蛋白质沉到管的底部形成紧密地深棕色斑块。

2. 如果溶液A在低温下产生沉淀,请30°C温浴10 min,以促进溶解。

3. 使用后,请旋紧瓶盖,防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。

4. 本试剂只能够用于体外实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果概不承担责任。

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