尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose

pyrophosphosphprylase，UGP）试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-237032

分光光度法 50管/48样

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

UGP尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性测定意义 

UDPG 焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将 1-磷酸葡萄糖与 UTP 分子合成为 UDP-葡萄糖（UDPG）。

UGP尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性测定原理

UGP 可逆催化反应生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将 NADP 转化为 NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。 

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

酶液提取

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。

3. 液体：直接检测。 

UGP尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性测定操作

1. 分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2. 取 1mL 石英比色皿，依次加入 500μL 试剂一，100μL 试剂二，100μL 试剂三，100μL 试剂四，100μL 试剂五，100μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 30s 的吸光值 A1 和 330s的吸光值 A2，△A=A2-A1

UGP尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性计算公式

（1）按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

蛋白质含量需要另外测定建议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒（货号：QYS-237014）。

（2）按照样本质量计算

酶活单位定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W

（3）按照细胞数量计算

酶活单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min /10⁴ cell）= [ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.643×ΔA

（4）按照液体体积计算

酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min/mL）＝[ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹]÷V 样÷T=321.54×ΔA V 反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：

比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g ；500：细胞或细菌总数，500 万。

注：系统试剂盒说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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