超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-23053

分光光度法 50管/48样

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

超氧阴离子(OFR)测定意义

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织

代谢异常，从而引起多种疾病。

超氧阴离子(OFR)测定原理

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成 NO －，NO －在对氨基苯磺酸和 α－萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在 530nm 处有特征吸收峰，

根据 A530 值可以计算样品中 O －含量，反应式 为 NH2OH + 2O － ＋H＋ → NO － ＋ H O ＋ H O 。

自备实验用品及仪器

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。

超氧阴离子(OFR)试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂四：氯仿，自备。

超氧阴离子提取

1.植物、动物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1  的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。

3.血清或培养液：直接测定。

超氧阴离子(OFR)测定操作表

详见说明书

超氧阴离子含量计算公式

标准曲线：y=0.0115x-0.0038，R2=0.9986

超氧阴离子含量计算公式：

1.组织：

（1）按照样本质量计算

超氧阴离子含量（μmol/g 鲜重）= (A530+0.0038)÷0.0115× V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3×2= 1.74×(A530+0.0038)÷W

超氧阴离子产生速率（μmol/ g·min）= 1.74×(A530+0.0038)÷W÷T= 0.087×(A530+0.0038)÷W

（2）按照蛋白质浓度计算

超氧阴离子含量（µmol/mg prot）= (A530+0.0038)÷0.0115× V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3×2= 1.74×(A530+0.0038)÷Cpr

超氧阴离子产生速率（µmol/mg prot·min）= 1.74×(A530+0.0038)÷Cpr÷T= 0.087×(A530+0.0038)÷Cpr

2.细菌，真菌：

超氧阴离子含量（µmol/10⁴ cell）=(A530+0.0038)÷0.0115× V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)×10-3×2

= 1.74×(A530+0.0038)÷细胞数量

超氧阴离子产生速率（µmol/10⁴ cell·min）= 1.74×(A530+0.0038)÷细胞数量÷T= 0.087×(A530+0.0038)÷细胞数量

3.血清或培养液

超氧阴离子 含量（µmol/L）= (A530+0.0038)÷0.0115× V 反总÷V 样×2= 1739.13×(A530+0.0038)

超氧阴离子产生速率（µmol/ L·min）=1739.13×(A530+0.0038) ÷T= 86.96×(A530+0.0038)

V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，2mL；V 样：反应中样品体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：

样品质量，g；T：反应时间，20min；2： 2分子 O2－参与反应生成 1 分子 NO2－。 

注意事项

1、 吸光值大于 0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、 样品制备好之后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。

3、 试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。

4、 最低检出限为 0.33µmol/L。

注：电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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