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技术服务 Recruitment

免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法：

材料：

上样buffer的配方(用前现配):

2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.8

35ul distilled water

2.5ul 2-mercaptoethanol

12.5ul 10%SDS

10ul 80% glycerol

2ul bromphenol blue

TNE buffer:

10mM Tris-HCl pH 8.0

10mM NaCl

0.5mM EDTA


方法：

1．用含有1% NP40的缓冲液重悬细胞，充分振荡。

2．在冰上孵育30分钟或37℃孵育10—15分钟

3．转入eppendorf管中离心3分钟

4．将上清轻轻倒入一干净试管，加入40—50 ul抗血清

5．冰上孵育2小时或4℃过夜

6．在TNE中加入100ul SPA 和100ul 5% BSA

7．冰上孵育2小时

8．离心使免疫复合物成球，用1ml含1%NP40,0.5% Na deoxychloate, 0.1% SDS 的TNE,在用超声波重悬

9．加入70ul的上样缓冲液，振荡。

10．热水中水浴90秒，离心1分钟，保留上清。

11．若不立即实验请低温保存。

（以上资料仅供参考）


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