24小时咨询电话:400-991-0197

微博 微博|1(6)123.jpg 手机RTX123.jpg

招聘服务
首页>实验中心>技术服务

技术服务 Recruitment

氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-231071

分光光度法 50管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测定意义:

GSH/GSSG 是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内 GSH 和 GSSG 含量以及GSH/GSSG  比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测定原理:

利用 2-VP 法测 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量。

 自备仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配置:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 支,4℃保存。

试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 40 mL 试剂三溶解,现配现用。

试剂六:液体×1 瓶,-20℃保存。临用前加入 0.5 mL 试剂三稀释,4℃保存。

粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清液(如上清不清澈,再离心 3min)待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);8000g 4℃离心 10min,取上清液(如上清不清澈,再离心 3min)的蒸馏水混匀待测。

3.  血清等液体:直接测定。

测定操作:

1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中保温 30min

3. 测定管:取 1 mL EP 管,加入 100 μ L 上清液,2 μ L 试剂二,盖紧后混匀,置于 37℃水浴 30min;开盖后依次加入 100 μ L 试剂四,700 μ L 试剂五,10 μ L 试剂六,迅速混匀后,测定 30 s  150 s 光吸收 A1  A2,计算 A=A2-A1

GSSG 含量计算公式:

1、标准条件下测定的回归方程为 y=0.0325x+0.046;x 为标准品浓度(nmol/mL),y 为吸光( A)

2、 按蛋白浓度计算

GSSG(nmol/mg prot)=( A-0.046)÷0.0325×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)=30.77×(A-0.046)÷Cpr

蛋白浓度需要另外测定,建议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒(货号:QYS-237014)

3、按样本鲜重计算

GSSG(nmol /g 鲜重)=( A-0.046)÷0.0325×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=30.77×(A-0.046)÷W

4、按细胞数量计算

GSSG(nmol/104 cell)=( A-0.046)÷0.0325×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量) =30.77×( A-0.046)÷细胞数量

5、按照液体体积计算

GSSG(nmol/mL)=( A-0.046)÷0.0325×V 样÷V 样=30.77×( A-0.046)

V 样:反应中加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积, 1mL;W:样品质量,g,Cpr:样本蛋白浓度(mg/mL)

注意事项:

1. 提取过程中去掉蛋白质,所以提取液不能用于测定蛋白含量。

2. 临用前配制的试剂配好后 4℃保存,2 天内使用完毕。

3. 反应温度.严格来说,为保证重复性,应在 25℃下进行反应。

4. 反应时间需精确控制,否则会影响反应速率计算,产生较大误差。样品中的 GSSG 浓度尽可能低一些,否则反应速率太大,没法控制,所以稀释倍数要尽量大些。

返回