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FDA 水解酶  Fluorescein diacetateFDA  试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-236018

可见分光光度法:50 管/24 样

注意 正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定测定意义

FDA 水解反应能很好的反应土壤中微生物活性和土壤质量的变化以及生态系统中有机质的转化,是土壤质量研究中的重要生物学指标之一

测定原理

FDA 是一种无色化合物,在介质中能被许多土壤酶所催化水解,并经脱水反应,产生酶解终产物荧光素,稳定不易被分解,并在 490nm 处有强吸收峰,通过检测 490nm 处的吸光值变化可计算得 FDA 水解酶活性

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅  

试剂组成和配制      

标准液:液体 5mL×1 瓶,4℃保存    

试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存    

试剂二:粉剂 1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 5mL 试剂三溶解  

试剂三:液体 50mL×1 瓶,4℃保存    

样本处理      

称取风干过 30-50 目筛土壤约 0.1g,备用  

测定操作表


空白管

标准管

对照管

测定管

样本g



0.1

0.1

标准液µL


100



蒸水µL

100




试剂一µL

500

500

600

500

试剂µL




100

充分混匀,30℃,震荡 1h

试剂µL

400

400

400

400

10000g25℃,离心 5min,取清测定 490nm 处吸光值 AA1=A 标准管-A 空白管,

A2=A 测定管-A 对照管

注意:空白管和标准管只需测定一次  

酶活性计算公式      

酶活性定义:每克土壤每天产生 1µmol 荧光素的量为一个酶活力单位

FDA 活性(µmol/d/g干重)=(△A2÷△A1×C 标准品)×V总÷W= 2.4×(△ A2÷△A1)÷W  

C 标准品:标准品浓度 100µmol/L ;V反总:反应总体积,1mL ;W:样本质量,g

注意事项      

1. 尽量采用新鲜土样或者短期低温保存样品,否则很难准确反映酶的活性

2. 测定之前进行预实验,若吸光值较高,请进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

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