游离胆固醇（free cholesterol, FC）含量测定试剂盒说明书

发布时间：2017-08-11 17：15：00      出处：齐一生物技术部       作者：生化试剂盒

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-234010

可见分光光度法：50 管/48 样

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

游离胆固醇（FC）含量测定意义：

FC 是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D 等生理活性物质的重要原料。FC 浓度可作为脂代谢的指标。

游离胆固醇（FC）含量测定原理：

FC 氧化酶催化 FC 生成△4-胆甾烯酮和 H2O2，过氧化物酶催化 H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在 500nm 有吸收峰，其颜色深浅与 FC 含量成正比。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。

游离胆固醇（FC）测定试剂组成和配制：

试剂一：异丙醇 50mL（自备）；

工作液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

标准品：液体 1mL×1 支，浓度为 0.5 μ mol/mL，4℃保存。

FC 的提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL 试剂一，超声波破碎 1min（强度 20％，超声 2s，停 1s），即 FC 待测液。

3．血清（浆）样品：直接测定。

游离胆固醇（FC）含量测定操作：

1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 500 nm，蒸馏水调零。

2. FC 工作液在 40℃水浴中预热 30min。

3. 标准管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 250μL FC 标准液和 750μL FC 工作液，混匀，静置 24h 后于 500nm 测定 A 标准管。

4. 测定管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 250μL FC 待测液和 750μL FC 工作液，混匀，静置 24h 后于 500nm 测定 A 测定管。

注意：标准管只需测定一次。

游离胆固醇（FC）含量计算公式：

1. 血清（浆）中 FC 含量计算：

FC 含量（μmol /dL）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管×100mL=50×A 测定管÷A 标准管

C 标准液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。

2. 组织中 FC 含量计算：

(1)按样本蛋白浓度计算

FC 含量（μmol / mg prot）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷Cpr= 0.5×A 测定管÷A 标准管÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

FC 含量（μmol / g 鲜重）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷W= 0.5×A 测定管÷A 标准管÷W

C 标准液：0.5μmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g/mL

3. 细胞、细菌中 FC 含量计算：

FC 含量（μmol /10⁴ cell）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（10⁴ cell /L）=0.5×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（104 cell /L）

 C 标准液：0.5μmol/mL。

最低检出限为1nmol/mL。

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