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BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-237014

分光光度法 50管/48样

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

蛋白含量(BCA 法)测定检测测定意义

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

蛋白含量(BCA 法)测定检测测定原理

碱性条件下,蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键,能将 Cu2+还原成 Cu+; 2 分子的 BCA 与 Cu+结合,生成紫色络合物,在 540-595nm 有吸收峰,562nm 处吸收峰最强。 

自备仪器和用品

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

蛋白含量(BCA 法)测定试剂组成和配制

试剂 A:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂 B:液体 1mL×1 支,4℃保存。

标准蛋白:液体 2 mL×1 支,4℃保存。

工作液配制:临用前请根据拟用工作液体积(样本数×1 mL),将试剂 A 和 B 按照 50:1的比例混合,盖紧后充分混匀。

蛋白含量(BCA 法)测定检样品中可溶性蛋白质提取 

1. 液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。

2. 组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即待测液。

3.   细菌、细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒, 7 秒,总时间 3min);然后 8000g4,离心 10min,取上清置于冰上待测。

测定操作

1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 562 nm,蒸馏水调零。

2. 工作液置于 60℃水浴预热 30 min。


空白管

标准管

测定管





蒸馏水(μL

20



标准品(μL


20


待测液(μL



20

工作液(μL

1000

1000

1000

混匀后置于 60℃保温 30min,于 1mL 比色皿在 562nm 处测定吸光值 A,分别记为 A 空白管、


A 标准管、A 测定。





注意:空白管和标准管只需要做一次。



计算公式




Cpr (mg/mL) = C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)= 0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)

Cpr (mg/g)= C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷ W = 0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷ W

W: 样本质量,g

蛋白含量(BCA 法)测定试剂注意事项 

BCA 法蛋白含量测定试剂盒,适用于测定蛋白浓度在 20-5000μg/ml 样品。测定前取 1-2 个样做预实验,若 A 测定管-A 空白管﹥1.5,需将样本用提取液稀释后再测定,以确保测定的准确性。

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