24小时咨询电话:400-991-0197

微博 微博|1(6)123.jpg 手机RTX123.jpg

招聘服务
首页>实验中心>技术服务

技术服务 Recruitment


抗坏血酸氧化酶(ascorbate oxidaseAAO)活性测定试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-231095

紫外分光光度法 50管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

抗坏血酸氧化酶AAO测定意义:

抗坏血酸氧化酶AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和 AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素 b 还原,该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。

抗坏血酸氧化酶AAO测定原理:

抗坏血酸氧化酶AAO 可直接氧化 AsA,通过测定 AsA 的氧化量,可计算得 AAO 活力。

实验中所需仪器及设备:

低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。

试剂组成和配制: 

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。

抗坏血酸氧化酶AAO粗酶液提取:

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

抗坏血酸氧化酶AAO 测定操作: 

1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 265 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。

3. 依次在 1 mL 石英比色皿中加入 100μL 上清液、850μL 预热的试剂二和 50μL 试剂三,迅速混匀后在 265nm 测定 10 s 和 130 s 光吸收 A1 和 A2,△A =A1-A2。

抗坏血酸氧化酶AAO活性计算公式:

(1).  按蛋白浓度计算

AAO 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T

= 92.4×△A÷Cpr

(2).  按样本质量计算

AAO 活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

AAO(nmol/min/g 鲜重) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T

= 92.4×△A÷W

ε:AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V 反总:反应体系总体积(L),1000μL=1×10-3 L1061mol=1×109nmolCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒(货号:QYS-237014)V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μL=0.1 mLV 样总:加入提取液体积,1mLW,样本质量,gT:催化反应时间(min),2min

注意事项:

配制好的试剂放在 4℃保存,三天内使用完

返回