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花色苷含量试剂盒说明书

 

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-23036

微量法 100管/96样

正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

花色苷含量测定意义:

花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素,属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中,使其呈现由红到紫等不同颜色,是植物主要的呈色物质。 

花色苷含量测定原理: 

采用 pH 示差法测定花色苷含量,当 pH 为 1.0 时花色苷在 530nm 处有最大吸收峰,而当 pH 为 4.5 时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在 530 处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同 pH 下的 530nm 和 700nm 处的吸光度值。pH 示差法减少了溶液 pH 和溶剂差异的影响,排除了其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。

花色苷含量试剂盒需自备的仪器和用品: 

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100 mL× 1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 20 mL× 1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 20 mL × 1 瓶,4℃保存;

花色苷的提取:

按照烘干样品质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 烘干样品,加入 1mL 提取液),充分匀浆后转移到 EP 管中,提取液定容至 1 mL,盖紧后 4℃浸提 24 h,8000 g,常温离心 10 min, 取上清液待测。

花色苷含量测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上;试剂一和试剂二 25℃(室温)预热 10min 以上;

2、取 20 µL 上清液和 180 µL 试剂一(相当于稀释 10 倍),静置 15min,分别测定 530nm 和 700nm 处的吸光值,分别记为 A1 和 A2。

3、 取 20 µL 上清液和 180 µL 试剂二(相当于稀释 10 倍),静置 15min,分别测定 530nm 和 700nm 处的吸光值,分别记为 A3 和 A4。

4、 计算△A=(A1-A2)-(A3-A4)

注意:如果A1大于1,可以适当加大稀释倍数,保证总体积200 µL不变,如10 µL上清液和190 µL试剂一(相当于稀释20倍);如果A1小于0.1,可以适当缩小稀释倍数,保证总体积不变,如100 µL上清液和100µL试剂一(相当于稀释2倍),使A1保持在0.1~1范围内,可提高检测灵敏度;同样调整上清液和试剂二体积比例;计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。

花色苷含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

花色苷含量(µg/g 干重)=[ΔA×V÷(ε×d)×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V:提取液体积,1×10-3L;ε:花色苷的摩尔消光系数,2.69×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;M: 花色苷的相对分子质量:449.2g/mol;F:稀释倍数;106:1g=106µg;W:样本干重:g。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

花色苷含量(µg/g 干重)=[ΔA×V÷(ε×d)×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W

V:提取液体积,1×10-3L;ε:花色苷的摩尔消光系数,2.69×104 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;M:花色苷的相对分子质量:449.2g/mol;F:稀释倍数;106:1g=106µg;W:样本干重:g。

注:电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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