非蛋白巯基测定试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-23086

微量法 100管/48样

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

非蛋白巯基测定意义：

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

非蛋白巯基测定原理：

巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最大吸收峰。

非蛋白巯基试剂盒自备实验用品：

天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。

非蛋白巯基试剂组成和配制：

提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 1 mL×1 管，4℃避光保存。

非蛋白巯基样品的制备：

1.动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后加入

 4mL 甲醇，室温震荡 10min， 然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2.细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1  的比例（建议 500万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 

300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

3.血清、培养液：取 0.1mL，加 0.4mL 甲醇，室温震荡 10min，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

非蛋白巯基测定操作步骤：

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。

2、操作表

详见说明书

混匀，25℃静置，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 412nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。

非蛋白巯基计算公式：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y = 1.7236 x，R² = 0.9994

1.组织：

详见说明书

2.血清、培养液：

详见说明书

3.细胞：

详见说明书

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.8618x，R² = 0.9994

1.组织：

详见说明书

2.血清、培养液：

详见说明书

3.细胞：

详见说明书

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；

注意事项

最低检出限为 10μmol/L。

注：电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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