24小时咨询电话:400-991-0197

微博 微博|1(6)123.jpg 手机RTX123.jpg

招聘服务
首页>实验中心>技术服务

技术服务 Recruitment

非蛋白巯基测定试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-23086

微量法 100管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

非蛋白巯基测定意义:

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能,对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

非蛋白巯基测定原理:

巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处有最大吸收峰。

非蛋白巯基试剂盒自备实验用品:

天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。

非蛋白巯基试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 1 mL×1 管,4℃避光保存。

非蛋白巯基样品的制备:

1.动物、植物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后加入

 4mL 甲醇,室温震荡 10min, 然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

2.细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1  的比例(建议 500万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 

300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min)然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

3.血清、培养液:取 0.1mL,加 0.4mL 甲醇,室温震荡 10min,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

非蛋白巯基测定操作步骤:

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。

2、操作表

详见说明书

混匀,25℃静置,于微量石英比色皿/96 孔板,测定 412nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。

非蛋白巯基计算公式:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线:y = 1.7236 x,R2 = 0.9994

1.组织:

详见说明书

2.血清、培养液:

详见说明书

3.细胞:

详见说明书

V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.8618x,R2 = 0.9994

1.组织:

详见说明书

2.血清、培养液:

详见说明书

3.细胞:

详见说明书

V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;

注:电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

返回