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原果胶含量试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-23098

微量法 100管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

原果胶含量测定意义

果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶,即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用,在食品、纺织、印染、烟草、

冶金等领域具有较广泛的应用。 

原果胶含量测定原理

原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,并进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在 530 nm 处有特征吸收峰。 

原果胶含量试剂盒需自备的仪器和用品

天平、研钵、常温离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、浓硫酸和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液一:液体 100mL×2 瓶,4℃保存。

提取液二:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。标准品:液体 1mL×1 支,4℃保存。

试剂一:浓硫酸,自备。

试剂二:液体 2mL×1 支,4℃保存。

试剂三:液体 3mL×1 瓶,4℃避光保存。

原果胶含量样品处理

将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为 1: 20 的比列(建议取约 0.05g 样

品,加入 1mL 提取液一),置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min,取出冷却后于 5000g、 25℃ 离心 10min,去掉上清,沉淀中再加入 1mL 提取液一重

复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入 1mL 提取液二,置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h,取出冷却后于 8000g、25℃离心15min,取上清液待测。

原果胶含量测定操作表

详见说明书

充分混匀,取 200μL 置于微量石英比色皿/96 孔板中,测定 530nm 处吸光值,分别记为 A1、A2、A3 和 A4。△A1=A2-A1,△A2=A4-A3

注意:空白管和标准管只需测定一次。计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C 标准×V 标) ×△A2÷△A1÷(W×V 样÷V 样总) = 0.25×△A2÷△ A1÷W

C 标准:标准品浓度,0.25mg/mL;V 标:反应体系中加入标准品体积,0.02mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,

1mL;W:样本鲜重,g。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C 标准×V 标) ×△A2÷△A1÷(W×V 样÷V 样总) =0.25×△A2÷△ A1÷W

C 标准:标准品浓度,0.25mg/mL;V 标:反应体系中加入标准品体积,0.02mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,

1mL; W:样本鲜重,g。

注意事项

1.浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅。

2.若吸光值超过 1,可将样本提取液进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

注:电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。



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