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单宁含量试剂盒说明书

 

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-23082

微量法 100管/96样

正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

单宁含量测定意义:

单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性,如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多

种金属离子发生络合或静电作用; 具有止血、抑制微生物、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。 

单宁含量测定原理: 

单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在 760nm 处有最大吸收峰。 

单宁含量试剂盒需自备的仪器和用品: 

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 4mL× 1 瓶,4℃保存; 

试剂二:液体 3mL × 1 瓶,4℃保存; 

单宁的提取:

按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL蒸馏水),充分匀浆后转移到 EP 管中,80℃水浴提取

 30min, 8000  g,25℃离心 10  min,取上清液待测。

单宁含量测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 760nm 处,蒸馏水调零;试剂一和试剂二 37℃预热 10min 以上;

2、操作表:

试剂名称(µL)对照管测定管

见详细说明书

混匀,室温静置 30min,760nm 处读取吸光值 A,ΔA=A 测定-A 对照,对照管只要做一管。

单宁含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0132x - 0.0035;x 为标准品浓度(µg/mL),y 为吸光值。

2、按样本鲜重计算:

单宁含量(µg /g 鲜重)= [(ΔA+0.0035) ÷0.0132×V1]÷(W×V1÷V2)=75.76×(ΔA+0.0035)÷W。

3、按样本蛋白浓度计算:

单宁含量(µg/mg prot)= [(ΔA+0.0035) ÷0.0132×V1]÷(V1×Cpr)=75.76×(ΔA+0.0035) ÷Cpr。

此法蛋白质含量需另外测定,我司提供三种方法蛋白质浓度试剂盒(QYS-237009)双缩脲法、(QYS-237011)考马斯亮蓝法、(QYS-237013)BCA法。

V1:加入样本体积,0.005mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0066x - 0.0035;x 为标准品浓度(µg/mL),y 为吸光值。

2、按样本鲜重计算:

单宁含量(µg/g 鲜重)=[(ΔA+ 0.0035)÷0.0066 × V1]÷(W × V1÷V2)=151.52 ×(ΔA+ 0.0035)÷W。

3、按样本蛋白浓度计算:

单宁含量(µg/mg prot)= [(ΔA+0.0035)÷0.0066×V1]÷(V1×Cpr)=151.52×(ΔA+0.0035)÷Cpr。

V1:加入样本体积,0.005mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

注:电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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