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羟自由基清除能力测定试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-23058

微量法  100管/96样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

羟自由基清除能力测定意义:

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是

样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

羟自由基清除能力测定原理:

H2O2/ Fe2+ 通过 Fenton 反应产生羟自由基,将邻二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化为 Fe3+ ,导致 536nm 吸光度下降,样品对 536nm

 吸光度下降速率的抑制程度,反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品:

恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

羟自由基清除能力试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

样品的制备:

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后

 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2.血清、果汁等液体样品可直接测定。

3.提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如 5 mg/mL。

羟自由基清除能力试剂盒操作步骤:

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 536nm,蒸馏水调零。

2、 操作表

空白管对照管测定管

试剂一(µL)303030

试剂二(µL)808080

试剂三(µL)202020

立即混匀,防止局部颜色过浓

样品(µL)50

试剂四(µL)2020

H2O(µL)7050

混匀 37℃,20min,于微量石英比色皿/96 孔板中测定 536nm 处吸光值,空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为 A 空、A 对和 A 测

注意:空白管和标准管只需测定一次。

羟自由基清除能力试剂盒计算公式:

羟自由基清除率 D% =(A 测-A 对)÷(A 空-A 对)×100%

A 空、A 对、A 测:空白管、对照管和测定管的吸光值。

注意事项:

为了比较不同样品羟自由基清除能力,对于同一批样品须加入等量的样品,血清、组织匀

浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。 

注:电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。


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