蛋白质羰基含量测定试剂盒

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-23049

分光光度法 50管/24样

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。（相关推荐：原装进口羟脯氨酸检测试剂盒）

蛋白质羰基含量测定意义

蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的

主要指标。

蛋白质羰基含量测定原理

羰基与 2,4-二硝基苯肼反应生成红色 2,4-二硝基苯腙，在 370nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水，无水乙醇，乙酸乙酯。

蛋白质羰基含量试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂 0.1g×5 支，4℃避光保存。（使用前根据样品数，每支加 1mL 水溶解，每支为10 个样品用量）

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。试剂六：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

样品处理

1.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10  的比例（建议称取约 0.1g组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，

于 4℃，4000g 离心 10min，取上清，加入 0.1mL试剂一，室温放置 10min，4℃，10000g 离心 10min，取上清待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1  的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超

声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体样本：直接测定。

测定步骤和操作表

详见说明书

蛋白质羰基含量计算公式

1.按照样本蛋白浓度计算

蛋白质羰基含量（μmol/mg prot）= [ΔA370×V 反总÷（ε×d）]÷(V 样×Cpr) =0.227×ΔA370÷Cpr

2.按照样本重量计算

蛋白质羰基含量（μmol/g  鲜重）= [ΔA370×V 反总÷（ε×d）]÷(W ×V 样÷V 样总) =0.227×ΔA370÷W

3.按照细胞数量计算

蛋白质羰基含量（μmol/10⁴cell）= [ΔA370×V 反总÷（ε×d）]÷(细胞数量 ×V 样÷V 样总)=0.227×ΔA370÷细胞数量

4.按照液体体积计算

蛋白质羰基含量（μmol/mL）= [ΔA370×V 反总÷（ε×d）]÷V 样=0.227×ΔA370

V 反总：反应体系总体积，1mL；ε：羰基微摩尔消光系数，22×10^-3 L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.2 mL；

V 样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，W：样本质量，g

注意事项

1.试剂一使用之前根据要测定的样品数现配，配置好后 4℃保存，若变为黑色，则不能使用。

2.试剂二见光易分解，反应需严格避光。

注：电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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