H2S 含量测定试剂盒说明书
For Research Use only
仅供研究用
货号:QYS-236083
分光光度法 50管/48样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
硫化氢H2S含量测定意义
H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
硫化氢H2S含量测定原理
H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
硫化氢H2S含量检测试剂组成和配制
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:液体 3mL×1 瓶,4℃避光保存。
样品处理
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清(浆):直接测定
操作表(取 1.5 mL 离心管,按照下表操作)
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| 空白管 |
| 测定管 |
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样品(μL) |
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| 250 |
H2O(μL) |
| 250 |
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试剂一(μL) |
| 250 |
| 250 |
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| 充分震荡混匀 |
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试剂二(μL) |
| 250 |
| 250 |
| 10000g,4℃,离心 10min,去上清,留沉淀 |
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H2O(μL) |
| 500 |
| 500 |
| 10000g,4℃,离心 10min,去上清,留沉淀 |
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试剂一(μL) |
| 250 |
| 250 |
试剂三(μL) |
| 250 |
| 250 |
|
| 充分震荡混匀 |
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试剂四(μL) |
| 250 |
| 250 |
| 10000g,4℃,离心 10min,取上清 |
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试剂五(μL) |
| 50 |
| 50 |
混匀,25℃静置 20min,1mL 玻璃比色皿,空白管调零,测定 A665
硫化氢H2S含量计算公式标准曲线回归方程为:y = 0.0044x,R2 = 0.9988
(1)组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S(μmol/mg prot)= (A665÷0.0044) ×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
蛋白浓度需另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒(货号:QYS-237014)
b.按照样本重量计算
H2S(μmol/g 鲜重)= (A665÷0.0044) ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3 = 0.727×A665÷W
(2)液体样品
H2S(μmol/L)= (A665÷0.0044)×V 反总÷V 样= 727×A665
(3) 细胞样本
H2S(μmol/104 cell)= (A665÷0.0044)×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个)×10-3=0.727×A665÷细胞数量(万个)
V 反总:反应总体积,0.8mL;V 样:反应中样品体积,0.25mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL
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