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H2S 含量测定试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-236083

分光光度法 50管/48样 

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

硫化氢H2S含量测定意义

H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

硫化氢H2S含量测定原理

H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

硫化氢H2S含量检测试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:液体 3mL×1 瓶,4℃避光保存。

样品处理

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清(浆):直接测定

操作表 1.5 mL 离心管,按照下表操作)



空白管


测定管






样品(μL




250

H2OμL


250



试剂一(μL


250


250



充分震荡混匀






试剂二(μL


250


250


10000g4℃,离心 10min,去上清,留沉淀


H2OμL


500


500


10000g4℃,离心 10min,去上清,留沉淀


试剂一(μL


250


250

试剂三(μL


250


250



充分震荡混匀






试剂四(μL


250


250


10000g4℃,离心 10min,取上清


试剂五(μL


50


50

混匀,25℃静置 20min1mL 玻璃比色皿,空白管调零,测定 A665

硫化氢H2S含量计算公式

标准曲线回归方程为:y = 0.0044x,R2 = 0.9988

(1)组织样品

a.按照蛋白浓度计算

H2S(μmol/mg prot)= (A665÷0.0044) ×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr

蛋白浓度需另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒(货号:QYS-237014)

b.按照样本重量计算

H2S(μmol/g 鲜重)=  (A665÷0.0044) ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3 = 0.727×A665÷W

(2)液体样品

H2S(μmol/L)=  (A665÷0.0044)×V 反总÷V 样= 727×A665

(3) 细胞样本

H2S(μmol/104 cell)= (A665÷0.0044)×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个)×10-3=0.727×A665÷细胞数量(万个)

V 反总:反应总体积,0.8mL;V 样:反应中样品体积,0.25mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL

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