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植物原花青素(Oligomeric Proantho Cyanidins, OPC)试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号:QYS-23064

微量法  100管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

植物原花青素(OPC)含量测定意义:

原花青素(Oligomeric Proantho Cyanidins,OPC)是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物,广泛存在于植物的各种器官中,具有极

强的抗氧化性和清除自由基的作用,广泛的应用于医药,食品,化妆品,保健品行业。

植物原花青素(OPC)含量测定原理:

在酸性条件下,植物原花青素 A 环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应,产生有色化合物,在 500nm 处有特征吸收峰,测定

 500nm 光吸收值,可计算植物中原花青素的含量。

自备实验用品及仪器:

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。

植物原花青素(OPC)试剂组成和配制:

提取液:60%乙醇,自备,4℃保存。(60mL 无水乙醇溶于 40mL 蒸馏水) 

试剂一:8%盐酸 10mL,自备,4℃保存。(800μL 盐酸溶于 9.2mL 甲醇) 

试剂二:粉剂 0.1g×1 瓶,4℃避光保存,临用前加 10 甲醇水溶解。

工作液:临用前按照用量将试剂一和试剂二按照 1:1 混合。

植物原花青素(OPC)提取:

称取约 0.1g 样本,加入 2mL 提取液,用超声提取法进行提取,超声功率 300W,破碎 5s, 间歇 8s,提取,30min, 10000g,25℃

离心 10min,取上清,用提取液定容至 2mL,待测。

测定操作表:

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。

2、 操作表

对照管测定管

样本(μL)4040

工作液(μL)160

H2O(μL)160

混匀,30℃水浴 30min,于微量石英比色皿/96 孔板中检测 500nm 处吸光值,ΔA=A 测定-A对照。

植物原花青素(OPC)含量计算公式:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线:y=0.0194x+0.0006,R2=0.999

OPC 含量(mg/g 鲜重)= (ΔA-0.0006)÷0.0194×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3= 0.515×(ΔA-0.0006)÷W

V 样总:加入提取液体积,2mL; V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;W:样品质量,g

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.0097x+0.0006,R2=0.999

OPC 含量(mg/g 鲜重)= (ΔA-0.0006)÷0.0097×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3= 1.03×(ΔA-0.0006)÷W

V 样总:加入提取液体积,2mL; V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;W:样品质量,g

试剂盒注意事项:

1、配制好的试剂二应尽快使用,4℃保存时间不超过一个月。

2、吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

注:电子版说明书仅供参考、具体请参考试剂盒纸质版说明书。

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