总胆固醇(T-CHO)含量试剂盒说明书

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-239461

COD-PAP 法 96T

总胆固醇(T-CHO)含量试剂盒试剂组成及配制:

酶液(酶剂)

25ml×1 瓶 Good’s 缓冲液 50mmol/L，pH6.7

苯酚 5mmol/L

4-AAP 0.3mmol/L

胆固醇酯酶 ≥50KU/L

胆固醇氧化酶 ≥25KU/L

过氧化物酶 ≥1.3KU/L

校准品 0.1ml×1 支 胆固醇 见标签

附送 96 孔平底酶标板一块 室温放置

总胆固醇(T-CHO)含量试剂盒测定原理：

生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正比，分别测定校标准管和样本管的吸光度值，计算胆固醇的含量。

总胆固醇(T-CHO)含量试剂盒操作过程:

1.样本处理:

①、血清(浆)：直接测定，如超过线性范围用生理盐水稀释后测定。

②、培养液样本：吸取培养液，1000 转/分，离心 10 分钟，取上清液测定。

[注]：一般建议细胞密度在 100 万个/ml 以上。

③、组织样本：准确称取组织重量，按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆介质，冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。

[注]:1、如组织样本不存在高脂样本，匀浆介质统一用磷酸盐缓冲液(0.1mol/L pH 7.4)或生理盐水进行提取。

2、如组织样本为高脂样本或部分为高脂样本，匀浆介质可统一用无水乙醇进行提取。

④、细胞样本：

A、细胞收集:将制备好的细胞悬液取出，1000 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，留细胞沉淀；用等渗缓冲液（推荐 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液）清洗 1～2 次，同样 1000 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，留细胞沉淀；

B、细胞破碎:加入 0.2～0.3ml 的匀浆介质（推荐 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水）进行匀浆，冰水浴条件下超声破碎(功率 300W，3～5 秒/次，间隔 30 秒,重复 3～5  次) 或手动匀浆， 制备好的匀浆液不离心直接测定。也可采用裂解液裂解( 推荐TritonX-100,1～2%,裂解 30～40 分钟)，裂解好的液体不离心直接测定。

[注]：一般建议收集的细胞密度在 100 万个/ml 以上。破碎好的液体可显微镜观察细胞是否破碎完全

总胆固醇(T-CHO)含量试剂盒操作表：

96 孔板操作,酶标仪比色

空白孔 校准孔 样本孔

蒸馏水（μl） 2.5

校准品（μl） 2.5

样本（μl） 2.5

工作液（μl） 250 250 250

混匀后 37℃孵育 10 分钟，波长510nm 处，酶标仪测定各孔吸光度值。

全自动上机操作

样本量/水 Sample Volume μl 2.5

工作液 reagent μl 250

37℃孵育 10 分钟,工作液+蒸馏水调零,测定光吸收值 A。

主波长 Main wavelength nm 510

反应类型 Reaction type 终点法

反应方向 Reaction direction 升反应(+)

总胆固醇(T-CHO)含量计算公式及举例:

1.血清等液体样本计算公式:

酶标仪比色:

全自动生化分析仪:

2.组织、细胞计算公式:

酶标仪比色:

全自动生化分析仪:

总胆固醇(T-CHO)试剂盒产品描述：

本试剂盒采用 COD-PAP 法配制，用于体外测定总胆固醇含量。适用于各型酶标仪、半自动或全自动生化分析仪

总胆固醇(T-CHO)含量试剂盒性能指标：

1、试剂空白管吸光度≤0.100（光径0.5cm）。

2、线性：0～10.34mmol/L 范围内，r2＞0.995。

3、精密度：CV≤3%，批间相对极差≤5%。

4、稳定性：原装试剂盒在 2℃～8℃避光保存，有效期为 12 个月。开启后 2℃～8℃避光保存，可稳定 3 个月。

总胆固醇(T-CHO)含量试剂盒注意事项：

1、本产品仅用于科研，不得用于临床诊断，切勿服用。

2、样品含量如超出检测范围上限时，可用生理盐水稀释样本后进行测定，测定结果乘以稀释倍数。

3、试剂防止葡萄糖、胆固醇等试剂的污染。

4、试剂与样本量可按照全自动生化分析仪的要求，按照 1：100 的比例增减。

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