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染色体核型分析材料、原理和步骤

DATE:2015-03-02    来源:齐一生物科技(上海)有限公司    点击数:

实验一 染色体核型分析

一、实验原理:

有丝分裂间期:染色质

有丝分裂期:染色体

各种生物染色体的形态,结构和数目都是相对稳定的。每一生物细胞内特定的染色体组成叫染色体组型。染色体组型分析也称核型分析。

从染色体玻片标本和染色体照片的对比分析,进行染色体分组,并对组内各染色体的长度,着丝点位置,臂比和随体有无等形态特征进行观测和描述,从而阐明生物的染色体组成,确定其染色体组型,这种过程称为染色体组型分析。

染色体组型分析有助于探明染色体组的演化和生物种属间的亲缘关系,对于遗传研究与人类染色体疾病的临床诊断也非常重要。

二、实验内容

取人类的体细胞有丝分裂中期的染色体显微照片,分析其核型。

(1)染色体数目:2n=46;

(2)染色体形态:观察染色体的长度、着丝粒及次缢痕的位置、随体的形态等。

①长度测定:指在显微镜下用测微尺直接测量到的从染色体一端到另一端的线性长度,通常以微米表示。染色体的绝对长度常因分裂期的差异、前处理方法的不同而有所变化,因此绝对长度的数据也只有相对意义。

相对长度:是每条染色体的绝对长度与正常细胞全部染色体总长度的比值,通常用百分比表示。相对长度不会因分裂期和前处理方法的不同而产生差异,因此是可靠的。所以,染色体长度通常以相对长度表示。

②着丝粒的位置:一般来说,每条染色体着丝粒的位置是恒定的,染色体的两臂常在着丝粒处呈不同程度的弯曲。着丝粒位置的测定常用Evans提出的方法,即以染色体的长臂(L)和短臂(S)的比值来表示。


臂比(长臂 / 短臂)

表示符号

正中着丝粒

中部着丝粒

近中着丝粒

近端着丝粒

端部着丝粒

1

1~1.7

1.7~3.0

3.0~7.0

7.0以上

M

m

sm

st

t

(3)核型表示法:

染色体长度可分为长(L)、中(M)和短(S)三类。

若不能明显分为三类,可以按长短顺序依次排列为A、B、C、D、E……来表示。

着丝点(kinetochore)的位置以M、m、sm、st、t来表示。

随体(satellite)以Sat表示。

异染色质(heterochromatin)以H表示。

次缢痕(secondary constriction)以Sc表示。

三、理论补充:

1、染色体在复制以后,含有纵向并列的两个染色单体,只有在着丝粒位置仍联在一起。着丝粒在染色体上的位置是固定的。由于着丝粒位置的不同,把染色体分成大致相等或长短不等的两臂。着丝粒所在的地方往往表现为一个缢痕,所以着丝粒又称初级缢痕。

有些染色体上除了初级缢痕外,还有一个次级缢痕,连上一个叫做随体的远端染色体小段。次级缢痕的位置也是固定的,在细胞分裂(cell division)将结束的时候,核内出现一个到几个核仁,核仁总出现在次级缢痕的地方,所以次级缢痕也叫核仁形成区。

2、染色体组型分析一般有四种方法。

(1)常规的形态分析。选用分裂旺盛细胞的有丝分裂中期的染色体制成染色体组型图,以测定各染色体的长度(微米)或相对长度(%),着丝粒位置及染色体两臂长的比例(臂比),鉴别随体及副缢痕的有无作为分析的依据。

(2)带型分析。显带技术是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色,使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。每个染色体都有特定的带纹,甚至每个染色体的长臂和短臂都有特异性。根据染色体的不同带型,可以更细致而可靠地识别染色体的个性。

(3)着色区段分析。染色体经低温、KCl和酶解,HCl或HCl与醋酸混合液体等处理后制片,能使染色体出现异固缩反应,使异染色质区段着色可见。在同源染色体之间着色区段基本相同,而在非同源染色体之间则有差别。因此用着色区段可以帮助识别染色体,作为分析染色体组型的一种方法。

(4)定量细胞化学方法。即根据细胞核、染色体组或每一个染色体的DNA含量以及其他化学特性去鉴别染色体。如DNA含量的差别,一般能反映染色体大小的差异,因此可作为组型分析的内容。

3、染色体配对影像系统功能:
  ◆核型图像预处理 拥有专业级数字图像处理能力,迅速滤除核型周边杂质,可处理完成多达20余种不同类型的核型图像,呈现精确核型 运用背景综合处理技术,自动增强染色体带纹识别能力。自动或手动分离各种形态的染色体,独创"四点拆分法",快速精确分离粘连或交叉染色体。
  ◆核型配对 提供自动与人工参与两种分析模式,染色体全自动识别,配对。配对结果独立操作,核型图中染色体可自由易位,重排到位。出色的拉直效果,可完成任意曲度染色体形态上的拉直自动染色体计数特有异常核型分析功能,可分析处理染色体数目异常引起的综合特征。系统将分配异常核型区域,给与参考结果。
  ◆核型标准图参照 根据ISCN国际体制,提供核型标准模式图,自动选择有无特定核型或核型分组标识的参照显示
  ◆异常核型数据分析 快速获取染色体核型物理参数,同时利用CASM提供的标准ISCN模板及条带比较、染色体拉伸、分类比较、统计学分析或条带增强等技术,来进行染色体核型图深入分析。



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