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生化试剂 Products

细菌总 RNA 快速抽提试剂盒
细菌总 RNA 快速抽提试剂盒

细菌总 RNA 快速抽提试剂盒

试剂盒

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联系方式

021-60348496

产品介绍

细菌总 RNA 快速抽提试剂盒

产品编号:QY-B625 

包装规格:50 次/100 次

试剂盒组成

组分  

50 次

100 次

Buffer Rlysis-B

50 ml

100 ml

DEPC-treated ddH2O

30 ml

 60 ml

 操作手册

1 份

1 份

保存方法及注意事项 

试剂盒于常温运输,4°C 保存。有效期见包装。 

产品介绍 

因为细菌 RNA 半衰期很短,RNA 很容易发生降解。针对这一难题,本试剂盒采用溶菌酶与裂解液 Buffer Rlysis-B 共同 作用,快速裂解样品,再通过氯仿抽提、无水乙醇沉淀等步骤,可获得浓度高、完整性好的 RNA。适合于从各种来源的细菌 (革兰氏阳性或阴性菌等)培养液中快速提取 RNA。使用本试剂盒,从 1 ml 对数生长期的细菌菌液中提取 5~15 µg 总 RNA, 可直接用于 RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。 

本产品具有以下特点: 

1. 操作简单,全过程可在40分钟内完成。 

2. 完整性好,纯化的RNA几乎不会发生降解。 

3. 纯度高,OD260/280一般为2.0。 

试剂准备 

自备试剂:无水乙醇、75%乙醇、溶菌酶、氯仿等。 

标准抽提步骤 

1. 取1 ml对数生长期的细菌,8,000 rpm 4°C离心1 min,彻底弃掉培养基,加100 µl溶菌酶,振荡混匀。(G -菌使用的溶 菌酶浓度为400 µg/ml,室温酶解3~5分钟;G +菌使用的溶菌酶浓度为3 mg/ml,室温酶解5~10分钟。) 

收集菌体后可用 500 µl DEPC-treated ddH2O 漂洗一次,10,000 rpm 离心 1 分钟,弃上清,进一步去除残留的培养基。 

2. 立即加入900 µl Buffer Rlysis-B震荡混匀,室温放置3 min。 

3. 向裂解样品中加入200 µl 氯仿,充分混匀。12,000 rpm 4°C离心5 min,取上清。 

4. 向上清液中加入1/3 体积无水乙醇,混匀,室温放置3 min,12,000 rpm 4°C离心5 min,小心倒掉上清。

 离心后,在离心管底部,可能无肉眼可见的沉淀产生,属正常现象,请继续以下操作。 

5. 用700 µl的75%乙醇(请用DEPC-treated ddH2O配制)洗涤沉淀,12,000 rpm 4°C离心3 min, 小心倒掉上清。 

6. 重复步骤5一次。 

7. 室温倒置10 min,尽可能使离心管中残留的乙醇彻底挥发。加入30-50 µl的DEPC-treated ddH2O溶解沉淀,立即使用或 -70°C长期保存。

如果残留的乙醇有挂壁现象,倒掉液体后再短暂离心,将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置 5~10 分钟至残留的乙 醇完全挥发。

吸取残液时注意不要将 RNA 沉淀取出,避免 RNA 损失

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