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免疫组化试剂 Immunohistochemistry

通用免疫组化试剂盒
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通用免疫组化试剂盒

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联系方式

021-60348496

产品介绍

免疫组化试剂盒使用说明书

保存方法:2-8℃保存。     有效期:一年。     生产日期:见封口。

适用种属:人,大鼠,小鼠,兔子,羊,鸡,牛等等

工作原理:

辣根过氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不会遮盖抗原的结合部位,具有较高活性及特异性,可溶性佳,生成的产物不扩散,可作用于多种底物,产生不同颜色且HRP穿透力强,易进入细胞内。DAB在 H2O2存在的情况下,可以作为HRP的电子供体,产生褐色的不溶颗粒,可作为显色的试剂。

试剂盒内容:


名称

规格

1

0.01mol/L pH6.0枸橼酸盐缓冲液

0.5L

2

PBS缓冲液

1L

3

广谱二抗

1.5mL

4

30%H2O 2

5mL

5

DAB显色液I

0.3mL

6

DAB显色液II

0.3mL

自备试剂:无水乙醇、苏木素。

操作步骤:

1. 60℃常规脱蜡至水后,将石蜡切片先后浸入二甲苯Ⅰ,二甲苯Ⅱ各10min。然后逐级降浓度酒精入水,每次3-5 min。

无水酒精

3-5min

90% 酒精

3-5min

85% 酒精

3-5min

75% 酒精

3-5min

PBS洗涤3次

每次5 min

2.热修复抗原: 将切片置于0.01mol/L pH6.0枸橼钠缓冲液,微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10 min后,反复1-2 次,置于室温自然冷却。0.01 mol/L  pH7.0左右的PBS洗涤3次,每次5 min 

3.消除内源性过氧化物酶:用3% H 2 O 2 室温孵育 5-10 min,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次,每次5 min;

4.滴加一抗: 滴加适当稀释的一抗到切片上,37℃孵育一定时间或者4℃过夜, pH7.4的PBS洗涤3次,每次5 min 。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)

5.加入广谱二抗,37℃孵育一段时间,取出后PBS洗涤3次,每次5 min。

6.DAB显色: 取DAB显色液I及II各50微升加至入1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片上,室温显色,镜下控制反应时间。若无背景出现则可继续显色。蒸馏水充分洗涤以终止反应。

7..观察显色后自来水冲,苏木精复染1-2min,,自来水冲10min,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,干燥,分析拍照。


齐一生物科技(上海)有限公司,如需详细说明及报价,可以来电咨询:021-60348467 60348496


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